Полимеразная цепная реакция (ПЦР) на туберкулез



План статьи:

1. Что такое ПЦР? 2. Достоинства проведения ПЦР 3. Недостатки проведения метода 4. Процесс сбора анализов 5. Расшифровка результатов

Туберкулез – одно из самых опасных заболеваний, от которого человечество страдает уже сотни лет. Даже несмотря на то, что ученым удалось определить возбудителя и изобрести антибиотики для его ликвидации, лечение не всегда проходит успешно. Основная причина — большой период латентной или скрытой формы болезни, который может длиться несколько лет. Несвоевременная диагностика значительно уменьшает шансы больного на выздоровление и полноценную жизнь.

Что такое ПЦР?

Для обнаружения микобактерий туберкулеза в организме уже более ста лет успешно применяется проба Манту. Хорошо себя зарекомендовали и другие методы: бактериологический посев в искусственной среде, микроскопия мазка, ИФА. Однако большое количество осложнений и ложноположительных результатов, а также длительность некоторых способов потребовало внедрения новых технологий в методику диагностики. Огромным прорывом в области микробиологии стало появление анализа ПЦР на туберкулез. Вот уже несколько десятилетий он показывает свою эффективность и широко применяется для дифференциальной диагностики различных форм туберкулеза.

Посев на питательной среде

ПЦР анализ на туберкулез или полимеразная цепная реакция – это метод обнаружения ДНК бактерий или их фрагментов, в основе которого лежит увеличение молекул нуклеиновой кислоты под действием фермента ДНК-полимеразы. Для положительного результата достаточно всего одной молекулы болезнетворной ДНК, поэтому этот метод считается высокочувствительным. Диагностика ПРЦ при туберкулезе более эффективна, чем посев микобактерий в искусственной среде, так как в отличие от культурального метода позволяет различить дикие и вакцинные штаммы, привитые БЦЖ. Это позволяет избежать ложноположитеьного результата и сделать диагноз более точным.

Достоинства проведения ПЦР

ПЦР диагностика на туберкулез позволяет обнаружить палочку Коха в любой биологической среде организма с определением их количественного состава даже на начальной стадии заболевания, когда микобактерии пребывают в «спячке». Диагностика болезни в латентной фазе позволяет вовремя начать профилактическое лечение, предотвратить развитие очагов воспаления в легких и появление осложнений в других органах и системах. Кроме этого ПЦР тест на туберкулез имеет ряд преимуществ:

  • высокая специфичность – 90-100%;
  • высокая скорость – от 4 часов до 2 суток;
  • высокая чувствительность, особенно при иммунодефиците;
  • дифференциальная диагностика.

Главное достоинство метода в том, что ПРЦ диагностика туберкулеза у детей дает возможность различить диссеминированную форму заболевания от ограниченной очаговой, даже при отрицательных результатах других анализов. Дифференциальная проверка позволяет выбрать правильную схему лечения и повысить эффективность терапии.

ПЦР диагностика

Высокая специфичность анализа достигается исключением перекрестных реакций с другими молекулами нуклеиновой кислоты, а высокая чувствительность дает возможность обнаружить микобактерии даже в малом объеме собранного материала. Метод ПЦР мокроты на туберкулез имеет наибольшую достоверность, его специфичность достигает 100% по сравнению с исследованием других биологических материалов.



Особый механизм ПЦР дает широкие возможности для выявления палочки Коха у пациентов с иммунодефицитом. По методике анализа реакция обнаруживает антигены, поэтому совсем неважно вырабатывает организм антитела к возбудителю, или нет. Таким образом, можно диагностировать внелегочные формы заболевания и запущенные случаи у больных с погрешностями в иммунной системе, что невозможно при использовании других методов.

Недостатки проведения метода

Несмотря на множество преимуществ и высокую чувствительность анализа, ПЦР на туберкулез может давать ложноотрицательный результат. Поскольку для диагностики берется очень небольшой объем биоматериала, не исключен тот факт, что возбудитель «прячется» в клетке или воспалительном очаге и не выделяется наружу.

Чувствительность данного метода у детей составляет 25-80%. Так, например, при рандомных исследованиях у группы больных с клинически доказанным диагнозом, анализ крови ПЦР на туберкулез дал положительный результат только у 50% пациентов. В связи с этим при проверке ребенка на патогенные микобактерии нельзя заменять один метод диагностики другим. Для того чтобы полностью удостовериться в отсутствии заражения нужно провести комплексное исследование сразу несколькими способами.

Анализ крови

Процесс сбора анализов

Главным условием достоверности ПЦР диагностики является соблюдение правил сбора биологических жидкостей на анализ. Загрязненный или неправильно собранный материал может стать причиной неправильного результата. Наиболее распространенными являются анализ мокроты, крови и мочи, но для более глубокой дифференциальной диагностики можно брать пробы из содержимого желудка, синовиальной жидкости, спинномозговой жидкости, смывной жидкости бронхов, спермы, секрета простаты.

ПЦР мочи на туберкулез сдают утром после гигиены наружных половых органов путем мочеиспускания в стерильный контейнер. Во время процедуры важно не касаться внутренних стенок емкости, чтобы не допустить попадания сторонних микроорганизмов. Женщинам, которые живут регулярной половой жизнью обязательно нужно поставить тампон во влагалище, чтобы избежать попадания сторонних выделений.

Анализ крови сдают утром натощак, а ПЦР мокроты на туберкулез может быть сделан в любое время суток с обязательной предварительной гигиеной полости рта. Это нужно чтобы удалить остатки пищи, которые могут попасть в контейнер. При отхаркивании мокроты важно не допустить попадания слюны и слизи из носоглотки в емкость, это может исказить данные анализа.

Исследование содержимого желудка проводят в условиях стационара рано утром, пока мокрота, проглоченная за ночь, находится в желудке. Для обнаружения микобактерий туберкулеза таким методом делают трехкратный посев, который с большой вероятностью позволяет выделить палочку Коха.

Желудок

Расшифровка результатов

Качественный анализ ПЦР дает 2 вида результатов «обнаружено» или «не обнаружено». Они означают положительный и отрицательный вердикт соответственно. Ответ «обнаружено» означает, что в исследуемом образце присутствует ДНК инфекционного агента, и с вероятностью 97% организм заражен туберкулезом. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии ДНК палочки Коха во взятой пробе биологического материала, и дает 97% вероятность, что в теле нет большого количества микобактерий, и 60%, что человек не заражен.

Наибольшую специфичность для диагностики туберкулеза имеют анализ крови и мокроты. При положительном результате они указывают на инфицирование организма, которое требует проведения срочных терапевтических мероприятий. Исследования других биоматериалов могут указывать не на течение заболевания, а всего лишь на присутствие чужеродных бактерий. Это происходит, когда человек является носителем болезни, но не распространяет инфекцию в окружающую среду и не заражает здоровых людей.

Количественный анализ ПЦР проводят реже, и расшифровкой его результатов занимается лечащий врач. Показатели исследования используют для определения активности заболевания и степени поражения организма. Опираясь на полученные данные, специалист может определить эффективность лечения, и при необходимости скорректировать терапевтическую схему.

Туберкулез всегда был и остается одной из самых серьезных проблем для здоровья всего человечества. Современные методы диагностики позволяют обнаружить заболевание на ранней стадии, чтобы вовремя начать лечение. Туберкулиновая проба, микроскопия мазка, посев бактерий на искусственные питательные среды хорошо зарекомендовали себя в сфере лабораторной диагностики туберкулеза. Однако длительное ожидание результатов и повышенная частота ложноположительных показаний сделало их устарелыми и вывело на первый план более современные технологии. ПЦР анализ является высокоспецифичным и высокоэффективным методом диагностики туберкулеза. Его результаты наиболее достоверны среди всех предложенных лабораторных методик обнаружения палочки Коха. Он позволяет не только вынести окончательный вердикт, но и провести необходимую дифференциальную диагностику.



Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *